Isolement sur milieux de culture

Principe : 

Il va s'agir de dilacérer le tissu végétal dans le cas de bactéries ou de prélever des spores et/ou fructifications fongiques. Puis d'ensemencer plusieurs milieux solides dans une boîte de Petri selon une méthode adaptée (techniques des quadrants, par épuisement…).  Les boites sont mises à incuber pour que la culture ou la colonie se développe. Ceci permet l'isolement de l'agent pathogène en culture pure. Pour obtenir la culture pure des repiquages peuvent être nécessaires : prélèvement de la culture de l'agent pathogène à isoler et l'ensemencer sur un nouveau milieu de culture.

Les milieux sont plus ou moins sélectifs :

• Milieux non sélectifs (de base ou usuels) :

Un milieu est dit non sélectif quand un maximum de micro-organismes peut se développer dessus. Dans le cas d'affections provoquées par un agent pathogène dont la nature n'est pas connue, ces milieux sont utilisés. Chacune des cultures de micro-organisme qui se développent sur le milieu non sélectif sont isolées séparément ce qui permet par la suite d'appliquer le postulat de Koch.

• Milieux sélectifs :

Un milieu de culture est dit sélectif pour une espèce microbienne lorsque seules les exigences nutritives et les conditions de développement spécifiques de cette espèce sont satisfaites. En modifiant différents facteurs, il est donc possible d’orienter un milieu pour que la croissance d’une espèce de bactérie soit favorisée et que les autres voient leur développement inhibé. Les paramètres à moduler sont la température d’incubation, le pH, la source nutritive (carbone, azote…), la présence d’antibiotiques (actidione, bacitracine…) ou d’antiseptiques (berberine, sélénite de sodium…).