Observation à la loupe binoculaire et au microscope optique

Principe : 

L'étude microscopique de la morphologie des insectes, des nématodes, des champignons et parfois des bactéries permet, dans la grande majeure partie des cas, de les identifier au niveau du genre voire de l'espèce. 

Observation et identification de champignons

• Prélever, sous loupe binoculaire à l’aide d’une aiguille pointue, des fragments végétaux malades et/ou des structures matérialisant la présence du bioagresseur. Si une sporulation est présente, celle-ci peut être aussi récupérée à l’aide d’un simple ruban adhésif transparent.
• Placer ce matériel végétal dans une goutte d’un liquide de montage déposée sur une lame microscopique, et plus ou moins dilacéré. Le liquide de montage est constitué de lactophénol ou plus communément d’acide lactique, plus un colorant tel que le bleu de méthyle (0.5%) ou la fuchsine rose (0.12%).
• Recouvrir la préparation avec une lamelle. Il est possible de l'écraser délicatement afin de libérer des spores (conidies ou ascospores).
• Observer au microscope optique les critères morphologiques du champignon (formes des spores, des fructifications...) pour l'identifier.

Sur certains échantillons, le champignon n'est pas assez développé et n'est donc pas identifiable. Pour cela il est possible de placer l'échantillon en chambre humide pour favoriser le développement de fructification.

Observation et identification d'insectes ou acariens

L’identification des insectes ou acariens s’appuie sur des caractéristiques morphologiques spécifiques à chaque espèce. Elle est réalisée par observations à la loupe binoculaire et au microscope. La plupart des caractères étudiés sont externes, mais pour certaines espèces l’identification peut nécessiter la dissection des individus observés. Pour les insectes de très petite taille ou des parties d'insectes, un montage entre lame et lamelle est nécessaire.

• Prendre plusieurs individus en bon état d'une même espèce, de préférence au stade adulte.
• Effectuer les montages lames et lamelles nécessaires et vérifier qu'ils soient de bonne qualité.
• Comparer des organes homologues et distinguer les stades, les castes et les sexes.
• Utiliser les ressources bibliographiques et/ou une collection de référence pour les comparaisons.
• Tenir compte des données biogéographiques et biologiques.

Observation et identification des nématodes

Les nématodes phytoparasites sont des vers transparents de taille microscopique (longueur de 200 à 8000 μm et diamètre de 10 à 40 μm) et donc invisibles à l’oeil nu.

• Choisir la bonne méthode d'extraction des nématodes. Les différents stades de développement des nématodes (enkysté ou filiforme) et les différents types de parasitisme (endoparasite ou ectoparasite), impliquent l’utilisation de diverses techniques d’extraction. 
• Observer à la loupe binoculaire les caractères morphologiques ainsi que biométriques (taille, forme des organes externes et internes, distances entre des organes donnés...) pour identifier les nématodes.

Attention :

• Ne pas identifier un insecte, un acarien, un nématode ou un champignon dans la précipitation.
• Ne pas hésiter en cas de doute dans l'identification, même léger, à envoyer les échantillons à un laboratoire spécialisé.

Les informations présentées sont issues des fiches rédigées par des élèves ingénieurs de la spécialisation protection des cultures de l'ENSAIA dans le cadre des actions de l'axe 2 du RMT VEGDIAG.